- In precedenza abbiamo caratterizzato la morte cellulare apoptotica indotta in una linea cellulare di linfoma follicolare, HF-1, dopo l’attivazione tramite il recettore delle cellule B (BCR) o il trattamento con Ca(2+) ionoforo A23187. Abbiamo analizzato la cinetica dell’apoptosi indotta da questi due trattamenti, come due modelli alternativi di apoptosi classica, mediante citometria a flusso utilizzando una nuova combinazione di coloranti citofluorometrici.
- Le cellule sono state colorate con una combinazione di annessina V-FITC, ioduro di propidio (PI) e SYTO 17 e analizzate mediante un sistema di citometria a flusso a due laser utilizzando 488-nm di argon e 633-nm HeNe laser raffreddati ad aria.
- In entrambi i modelli apoptotici, le prime cellule apoptotiche sono state rilevate mediante colorazione SYTO 17. L’alterazione dell’intensità della colorazione di SYTO 17 è stata seguita da un aumento dell’assorbimento di PI. Infine, le cellule apoptotiche sono state etichettate con annessina V nell’apoptosi indotta da BCR. Al contrario, durante il trattamento con Ca(2+) ionoforo A23187, le cellule sono diventate positive per l’annessina V prima che per PI.
- Il nuovo colorante citofluorimetrico, SYTO 17, discrimina le alterazioni apoptotiche prima dell’annessina V e PI. PI discrimina anche le alterazioni apoptotiche prima della perdita dell’asimmetria della membrana plasmatica da BCR ma non dall’apoptosi indotta da Ca(2+) ionoforo A23187. Infine, la combinazione di questi tre coloranti citofluorometrici consente un rilevamento efficace delle sottopopolazioni apoptotiche e l’ordinamento degli eventi apoptotici mediante citometria a flusso.
Rilevazione dell’apoptosi indotta da virus dell’enterite virale gosling di nuovo tipo in vitro mediante fluoresceina annessina V – FITC /PI doppia etichettatura.
- Per ottenere una migliore comprensione della patogenesi del nuovo tipo di virus dell’enterite virale gosling (NGVEV) e la relazione tra NGVEV e cellule ospiti.
- L’apoptosi dei fibroblasti dell’embrione di anatra (DEF) indotta da NGVEV è stata studiata mediante selezionatore cellulare attivato a fluorescenza (FACS) e microscopio a fluorescenza dopo che le cellule sono state colorate con Annexin V-FITC e ioduro di propidio (PI).
- Colorando le cellule con una combinazione di fluoresceina, annessina V-FITC e PI, è possibile distinguere e analizzare quantitativamente cellule non apoptotiche (Annexina V-FITC negativa/PI negativa) , cellule apoptotiche precoci (Annexina V-FITC positiva/PI negativa ), cellule tardive apoptotiche/necrotiche (Annexin V-FITC positivo/PI positivo) e cellule morte (Annexin V-FITC negativo/PI positivo) mediante citometria a flusso e microscopio a fluorescenza. La percentuale di cellule apoptotiche è aumentata con il tempo di incubazione e ha raggiunto un massimo a 120 h dopo l’infezione, mentre la percentuale di cellule non apoptotiche è diminuita.
- NGVEV può indurre le cellule DEF infette a subire l’apoptosi e l’apoptosi si verifica prima della necrosi.
Un metodo a base di ioduro di propidio e annessina V-FITC per rilevare l’apoptosi in una linea cellulare di cancro del polmone non a piccole cellule.
- La colorazione con annessina V e ioduro di propidio è ampiamente utilizzata per determinare la morte cellulare per apoptosi. In presenza di ioni Ca 2+ , l’annessina V ha una forte affinità di legame per la fosfatidilserina, un fosfolipide di membrana che durante l’apoptosi viene traslocato dal lato interno della membrana cellulare al suo lato esterno. D’altra parte, lo ioduro di propidio ha la capacità di legarsi al DNA e può entrare solo nelle cellule necrotiche o tardive apoptotiche.
- Questo capitolo descrive un metodo comunemente usato per il rilevamento dell’apoptosi in una linea cellulare di cancro del polmone non a piccole cellule utilizzando l’annessina V e il colorante ioduro di propidio. Descriviamo il rilevamento di diversi stadi di apoptosi nella linea cellulare di cancro del polmone A549 trattata con diidroartemisinina (DHA). Questo metodo di rilevamento dell’apoptosi può essere utilizzato per determinare l’efficacia di diversi tipi di farmaci su linee cellulari di cancro in coltura.
Monitoraggio dello scrambling dei fosfolipidi di membrana negli eritrociti umani e nelle cellule K562 con FM1-43 – un confronto con l’annessina V – FITC .
- Il colorante stirilico FM1-43 diventa altamente fluorescente quando si lega alle membrane cellulari. La rottura dell’asimmetria fosfolipidica di membrana nei linfociti T stimolati con ionoforo aumenta ulteriormente questa fluorescenza [Zweifach, 2000]. In questo studio, è stata esplorata la capacità di FM1-43 di monitorare il rimescolamento dei fosfolipidi di membrana utilizzando la citometria a flusso negli eritrociti umani e nelle cellule progenitrici degli eritrociti umani K562. Per il confronto è stata utilizzata l’annessina V-FITC della sonda specifica della fosfatidilserina Ca(2+)-dipendente. I dati presentati mostrano che la perdita di asimmetria fosfolipidica che potrebbe essere indotta negli eritrociti umani da elevati Ca(2+) intracellulare o da composti anfifilici intercalati membrana strutturalmente diversi aumenta la fluorescenza FM1-43 da due a cinque volte.
- Il profilo della fluorescenza FM1-43 per vari trattamenti assomiglia a quello dell’esposizione alla fosfatidilserina riportata dall’annessina V-FITC. FM1-43 ha rilevato l’inizio dello scrambling in modo più efficiente rispetto all’annessina V-FITC. Il rimescolamento indotto da anfifili ha dimostrato di essere un processo indipendente da Ca(2+). Il monitoraggio dello scrambling nelle cellule K562 causate dal rilascio di Ca(2+) indotto da NEM dai depositi intracellulari e dal trattamento con Ca(2+) e ionoforo A23187 ha mostrato che l’aumento della fluorescenza FM1-43 era ben correlato al numero di annessina V- Cellule fosfatidilserina-positive rilevate da FITC. I risultati qui presentati mostrano l’utilità di FM1-43 come un marcatore Ca(2+)-indipendente di dissipazione nella distribuzione asimmetrica dei fosfolipidi di membrana indotta da vari stimoli in cellule sia nucleate che non nucleate.
Studio fluorometrico dell’asimmetria fosfolipidica della membrana della testa dello sperma di coniglio durante la capacitazione e la reazione acrosomiale utilizzando l’Annessina – V FITC .
- Questo studio è stato condotto per valutare la traslocazione della fosfatidilserina nella membrana plasmatica della testa del gradiente di Percoll purificato dallo sperma dell’epididimo cauda del coniglio durante la capacitazione e la reazione acrosomiale (AR) utilizzando l’Annessina-V. Lo ioduro di propidio è stato utilizzato come controllo per respingere le cellule morte o morenti.
- La presenza e la distribuzione dei siti di legame dell’annessina-V sono state analizzate mediante fluorocitometria a flusso e microscopia confocale. Dopo 6 h di incubazione dello sperma nel mezzo di capacitazione, il numero di cellule colorate positivamente con l’annessina-V ha mostrato un piccolo ma significativo incremento.
- I siti di legame dell’annessina-V prodotti durante la capacitazione sono stati trovati principalmente nella regione post-acrosomale della membrana plasmatica della testa dello sperma.
- Dopo l’induzione di AR con progesterone, la localizzazione della fosfatidilserina è stata modificata e i siti di legame dell’Annessina-V sono stati trovati quasi solo nella regione acrosomiale, ma con un numero maggiore di siti di legame nell’area equatoriale. Al contrario, dopo l’induzione di AR con A23187, la traslocazione della fosfatidilserina, sebbene predominante sulla regione acrosomiale, è stata osservata anche nella regione post-acrosomale.
- La destabilizzazione della membrana plasmatica durante la capacitazione e l’AR possono essere importanti per la fusione spermatozoo-ovocita.
Analisi confocale dell’esternalizzazione della fosfatidilserina con l’uso dell’annessina V biotinilata rivelata con streptavidina – FITC , -europio, -ficoeritrina o -Texas Red in cellule apoptotiche trattate con ossisterolo.
- Per analizzare l’esternalizzazione della fosfatidilserina tramite l’annessina V su cellule apoptotiche mediante microscopia confocale a scansione laser e analisi fattoriale di sequenze di immagini biomediche (FAMIS).
- Streptavidina-fluoresceina isotiocianato (FITC), -europio (Eu), -ficoeritrina (PE) e -Texas Red (TR) sono stati scelti per rivelare il legame dell’annessina V biotinilata su cellule leucemiche umane U937 apoptotiche e cellule endoteliali umane ECV-304 indotte in trattamento con 7-chetocolesterolo o 7 beta-idrossicolesterolo. L’eccitazione di ciascun fluorocromo è stata ottenuta mediante la selezione di linee specifiche (351 + 364 nm, 488 nm) del laser ad argon di un microscopio confocale. Sono state eseguite serie temporali e spettrali per caratterizzare ciascun fluorocromo. FAMIS è stato applicato a queste serie per stimare le immagini corrispondenti alle macchie.
- Ciascun fluorocromo è stato chiaramente distinto e le immagini hanno mostrato la localizzazione della fosfatidilserina, che è stata migliorata dall’analisi dell’immagine.
Annexin V Apoptosis Detection Kit (FITC) |
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abx290002-100test | Abbexa | 100 test | 537 EUR |
Annexin V Apoptosis Detection Kit (FITC) |
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abx290014-200test | Abbexa | 200 test | 481 EUR |
Annexin V-FITC Apoptosis Kit Plus |
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K2057-100 | ApexBio | 100 assays | 516 EUR |
Annexin V-FITC Apoptosis Kit Plus |
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K2057-25 | ApexBio | 25 assays | 251 EUR |
Annexin V-FITC Apoptosis Kit Plus |
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K2057-400 | ApexBio | 400 assays | 1059 EUR |
Annexin V-FITC Apoptosis Kit Plus |
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K201-100 | Biovision | 501 EUR | |
Annexin V-FITC Apoptosis Kit Plus |
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K201-25 | Biovision | 240 EUR | |
Annexin V-FITC Apoptosis Kit Plus |
|||
K201-400 | Biovision | 947 EUR | |
Annexin V Apoptosis Detection Kit (FITC) |
|||
55R-1265 | Fitzgerald | 25 assays | 277 EUR |
Annexin V, Recombinant |
|||
20014 | AAT Bioquest | 100 ug | 219 EUR |
Annexin V, Recombinant |
|||
20015 | AAT Bioquest | 1 mg | 702 EUR |
Annexin V PE |
|||
EXB0027 | ExBio | 100 tests | 204 EUR |
Annexin V APC |
|||
EXB0028 | ExBio | 100 tests | 204 EUR |
Annexin V, CF770 |
|||
29046 | Biotium | 25ug | 342 EUR |
Annexin V, CF790 |
|||
29047 | Biotium | 25ug | 366 EUR |
Annexin V siRNA |
|||
20-abx907673 | Abbexa |
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|
Annexin V siRNA |
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20-abx907674 | Abbexa |
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Annexin V siRNA |
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20-abx900343 | Abbexa |
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Annexin V (PE) |
|||
abx090613-100tests | Abbexa | 100 tests | 537 EUR |
Annexin V (APC) |
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abx090615-100tests | Abbexa | 100 tests | 599 EUR |
Annexin V Antibody |
|||
49376-100ul | SAB | 100ul | 333 EUR |
Annexin V Antibody |
|||
49376-50ul | SAB | 50ul | 239 EUR |
Annexin V antibody |
|||
PAab09988 | Lifescience Market | 100 ug | 386 EUR |
anti-Annexin V |
|||
YF-PA10225 | Abfrontier | 50 ug | 363 EUR |
anti-Annexin V |
|||
YF-PA10226 | Abfrontier | 100 ul | 403 EUR |
anti-Annexin V |
|||
YF-PA10227 | Abfrontier | 100 ug | 403 EUR |
Annexin V Antibody |
|||
3357-100 | Biovision | 387 EUR | |
Annexin V Antibody |
|||
3357-30T | Biovision | 146 EUR | |
anti-Annexin V |
|||
YF-PA23217 | Abfrontier | 50 ul | 334 EUR |
Annexin V antibody |
|||
20R-1522 | Fitzgerald | 100 ug | 651 EUR |
Annexin V antibody |
|||
10R-7939 | Fitzgerald | 100 ug | 430 EUR |
Annexin V antibody |
|||
70R-11770 | Fitzgerald | 100 ug | 527 EUR |
Annexin V antibody |
|||
70R-13691 | Fitzgerald | 100 ug | 322 EUR |
Annexin V (FITC) / PI Apoptosis Detection Kit |
|||
abx090601-100tests | Abbexa | 100 tests | 460 EUR |
Annexin V / PI Apoptosis Detection Kit (FITC) |
|||
abx290007-100test | Abbexa | 100 test | 453 EUR |
Annexin V / 7ADD Apoptosis Detection Kit (FITC) |
|||
abx290008-100test | Abbexa | 100 test | 453 EUR |
Aposcreen Annexin V Apoptosis Kit : FITC (OKSB00007) |
|||
OKSB00007 | Aviva Systems Biology | 100 Tests | 513 EUR |
Annexin V Apoptosis Detection Kit : FITC (OKTA00003) |
|||
OKTA00003 | Aviva Systems Biology | KIT | 317 EUR |
Annexin V-FITC/PI Apoptosis Detection Kit |
|||
A211-01 | Vazyme | 50 rxn | 216 EUR |
Annexin V-FITC/PI Apoptosis Detection Kit |
|||
A211-02 | Vazyme | 100 rxn | 295 EUR |
Annexin V Apoptosis Detection Kit Plus (FITC) |
|||
55R-1302 | Fitzgerald | 25 assays | 296 EUR |
Annexin V, sulforhodamine 101 conjugate (Texas-Red Annexin V) |
|||
29002 | Biotium | 0.5ML | 277 EUR |
Annexin V (FITC) / 7-AAD Apoptosis Detection Kit |
|||
abx090603-100tests | Abbexa | 100 tests | 495 EUR |
Annexin V-FITC / PI Cell Apoptosis Detection Kit |
|||
20-abx098246 | Abbexa |
|
|
Annexin V-Cy5 conjugate |
|||
20066 | AAT Bioquest | 100 Tests | 219 EUR |
Annexin V-Cy7 conjugate |
|||
20068 | AAT Bioquest | 100 Tests | 219 EUR |
Annexin V, AF350 conjugate |
|||
20090 | AAT Bioquest | 100 tests | 219 EUR |
Annexin V, AF488 conjugate |
|||
20092 | AAT Bioquest | 100 tests | 219 EUR |
Annexin V, AF594 conjugate |
|||
20096 | AAT Bioquest | 100 tests | 219 EUR |
Recombinant Annexin V (ANXA5) |
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4-RPA259Hu02 | Cloud-Clone |
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Active Annexin V (ANXA5) |
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4-APA259Ra01 | Cloud-Clone |
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Annexin V Dyomics 647 |
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EXB0023 | ExBio | 100 tests | 222 EUR |
Annexin V Polyclonal Antibody |
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27222-100ul | SAB | 100ul | 252 EUR |
Annexin V Polyclonal Antibody |
|||
27222-50ul | SAB | 50ul | 187 EUR |
Annexin V (ANXA5) Antibody |
|||
20-abx121016 | Abbexa |
|
|
Annexin V (ANXA5) Antibody |
|||
20-abx109257 | Abbexa |
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|
Annexin V (ANXA5) Antibody |
|||
20-abx109540 | Abbexa |
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|
Annexin V (ANXA5) Antibody |
|||
20-abx110998 | Abbexa |
|
|
Annexin V, CF647 conjugate |
|||
29003 | Biotium | 0.5ML | 307 EUR |
Annexin V, CF555 conjugate |
|||
29004 | Biotium | 0.5ML | 307 EUR |
Annexin V, CF488A conjugate |
|||
29005 | Biotium | 0.5ML | 307 EUR |
Annexin V, CF750 conjugate |
|||
29006 | Biotium | 25ug | 342 EUR |
Annexin V, CF680 conjugate |
|||
29007 | Biotium | 25ug | 342 EUR |
Annexin V, CF633 conjugate |
|||
29008 | Biotium | 0.5ML | 307 EUR |
Annexin V, CF405M conjugate |
|||
29009 | Biotium | 0.5ML | 307 EUR |
Annexin V, CF568 conjugate |
|||
29010 | Biotium | 0.5ML | 307 EUR |
Annexin V, CF594 conjugate |
|||
29011 | Biotium | 0.5ML | 307 EUR |
Annexin V, CF350 conjugate |
|||
29012 | Biotium | 0.5mL | 307 EUR |
Annexin V, Biotin conjugate |
|||
29013 | Biotium | 0.5mL | 307 EUR |
Annexin V, CF640R conjugate |
|||
29014 | Biotium | 0.5mL | 307 EUR |
Annexin V, CF660R conjugate |
|||
29069 | Biotium | 0.5mL | 311 EUR |
Annexin V, CF680R conjugate |
|||
29070 | Biotium | 25ug | 344 EUR |
Annexin V, CF800 conjugate |
|||
29078 | Biotium | 25ug | 367 EUR |
Annexin V, CF700 conjugate |
|||
29082 | Biotium | 25ug | 357 EUR |
Annexin V, CF450 conjugate |
|||
29083 | Biotium | 0.5mL | 303 EUR |
Annexin V (ANXA5) Antibody |
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20-abx001443 | Abbexa |
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Annexin V Binding Buffer |
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abx090621-100tests | Abbexa | 100 tests | 286 EUR |
Annexin V (ANXA5) Antibody |
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abx038319-100ug | Abbexa | 100 ug | 391 EUR |
Annexin V (ANXA5) Antibody |
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abx037408-100ug | Abbexa | 100 ug | 391 EUR |
Annexin V (ANXA5) Antibody |
|||
abx032878-400ul | Abbexa | 400 ul | 523 EUR |
Annexin V (ANXA5) Antibody |
|||
abx032878-80l | Abbexa | 80 µl | 286 EUR |
Annexin V (ANXA5) Antibody |
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abx032879-400ul | Abbexa | 400 ul | 523 EUR |
Annexin V (ANXA5) Antibody |
|||
abx032879-80l | Abbexa | 80 µl | 286 EUR |
Annexin V (ANXA5) Antibody |
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abx412125-01mg | Abbexa | 0.1 mg | 899 EUR |
Annexin V (ANXA5) Antibody |
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abx414511-01mg | Abbexa | 0.1 mg | 439 EUR |
Annexin V Blocking Peptide |
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20-abx161016 | Abbexa |
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Annexin V (ANXA5) Antibody |
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abx230436-100ug | Abbexa | 100 ug | 481 EUR |
Annexin V (ANXA5) Antibody |
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abx230437-100ug | Abbexa | 100 ug | 481 EUR |
Sulle cellule apoptotiche è possibile analizzare le differenze nella migliore visualizzazione della fosfatidilserina in serie elaborate da FAMIS con l’uso dell’annessina V biotinilata rivelata con streptavidina-FITC, -Eu, -PE o -TR