Analisi citometrica a flusso di sottopopolazioni apoptotiche con una combinazione di annessina V-FITC, ioduro di propidio e SYTO 17

  • In precedenza abbiamo caratterizzato la morte cellulare apoptotica indotta in una linea cellulare di linfoma follicolare, HF-1, dopo l’attivazione tramite il recettore delle cellule B (BCR) o il trattamento con Ca(2+) ionoforo A23187. Abbiamo analizzato la cinetica dell’apoptosi indotta da questi due trattamenti, come due modelli alternativi di apoptosi classica, mediante citometria a flusso utilizzando una nuova combinazione di coloranti citofluorometrici.
  • Le cellule sono state colorate con una combinazione di annessina V-FITC, ioduro di propidio (PI) e SYTO 17 e analizzate mediante un sistema di citometria a flusso a due laser utilizzando 488-nm di argon e 633-nm HeNe laser raffreddati ad aria.
  • In entrambi i modelli apoptotici, le prime cellule apoptotiche sono state rilevate mediante colorazione SYTO 17. L’alterazione dell’intensità della colorazione di SYTO 17 è stata seguita da un aumento dell’assorbimento di PI. Infine, le cellule apoptotiche sono state etichettate con annessina V nell’apoptosi indotta da BCR. Al contrario, durante il trattamento con Ca(2+) ionoforo A23187, le cellule sono diventate positive per l’annessina V prima che per PI.
  • Il nuovo colorante citofluorimetrico, SYTO 17, discrimina le alterazioni apoptotiche prima dell’annessina V e PI. PI discrimina anche le alterazioni apoptotiche prima della perdita dell’asimmetria della membrana plasmatica da BCR ma non dall’apoptosi indotta da Ca(2+) ionoforo A23187. Infine, la combinazione di questi tre coloranti citofluorometrici consente un rilevamento efficace delle sottopopolazioni apoptotiche e l’ordinamento degli eventi apoptotici mediante citometria a flusso.

 

Rilevazione dell’apoptosi indotta da virus dell’enterite virale gosling di nuovo tipo in vitro mediante fluoresceina  annessina  V – FITC /PI doppia etichettatura.

  1. Per ottenere una migliore comprensione della patogenesi del nuovo tipo di virus dell’enterite virale gosling (NGVEV) e la relazione tra NGVEV e cellule ospiti.
  2. L’apoptosi dei fibroblasti dell’embrione di anatra (DEF) indotta da NGVEV è stata studiata mediante selezionatore cellulare attivato a fluorescenza (FACS) e microscopio a fluorescenza dopo che le cellule sono state colorate con Annexin V-FITC e ioduro di propidio (PI).
  3. Colorando le cellule con una combinazione di fluoresceina, annessina V-FITC e PI, è possibile distinguere e analizzare quantitativamente cellule non apoptotiche (Annexina V-FITC negativa/PI negativa) , cellule apoptotiche precoci (Annexina V-FITC positiva/PI negativa ), cellule tardive apoptotiche/necrotiche (Annexin V-FITC positivo/PI positivo) e cellule morte (Annexin V-FITC negativo/PI positivo) mediante citometria a flusso e microscopio a fluorescenza. La percentuale di cellule apoptotiche è aumentata con il tempo di incubazione e ha raggiunto un massimo a 120 h dopo l’infezione, mentre la percentuale di cellule non apoptotiche è diminuita.
  4. NGVEV può indurre le cellule DEF infette a subire l’apoptosi e l’apoptosi si verifica prima della necrosi.

Un metodo a base di ioduro di propidio e annessina V-FITC per rilevare l’apoptosi in una linea cellulare di cancro del polmone non a piccole cellule.

  1. La colorazione con annessina V e ioduro di propidio è ampiamente utilizzata per determinare la morte cellulare per apoptosi. In presenza di ioni Ca 2+  , l’annessina V ha una forte affinità di legame per la fosfatidilserina, un fosfolipide di membrana che durante l’apoptosi viene traslocato dal lato interno della membrana cellulare al suo lato esterno. D’altra parte, lo ioduro di propidio ha la capacità di legarsi al DNA e può entrare solo nelle cellule necrotiche o tardive apoptotiche.
  2. Questo capitolo descrive un metodo comunemente usato per il rilevamento dell’apoptosi in una linea cellulare di cancro del polmone non a piccole cellule utilizzando l’annessina V e il colorante ioduro di propidio. Descriviamo il rilevamento di diversi stadi di apoptosi nella linea cellulare di cancro del polmone A549 trattata con diidroartemisinina (DHA). Questo metodo di rilevamento dell’apoptosi può essere utilizzato per determinare l’efficacia di diversi tipi di farmaci su linee cellulari di cancro in coltura.

Monitoraggio dello scrambling dei fosfolipidi di membrana negli eritrociti umani e nelle cellule K562 con FM1-43 – un confronto con  l’annessina  V – FITC .

  • Il colorante stirilico FM1-43 diventa altamente fluorescente quando si lega alle membrane cellulari. La rottura dell’asimmetria fosfolipidica di membrana nei linfociti T stimolati con ionoforo aumenta ulteriormente questa fluorescenza [Zweifach, 2000]. In questo studio, è stata esplorata la capacità di FM1-43 di monitorare il rimescolamento dei fosfolipidi di membrana utilizzando la citometria a flusso negli eritrociti umani e nelle cellule progenitrici degli eritrociti umani K562. Per il confronto è stata utilizzata l’annessina V-FITC della sonda specifica della fosfatidilserina Ca(2+)-dipendente. I dati presentati mostrano che la perdita di asimmetria fosfolipidica che potrebbe essere indotta negli eritrociti umani da elevati Ca(2+) intracellulare o da composti anfifilici intercalati membrana strutturalmente diversi aumenta la fluorescenza FM1-43 da due a cinque volte.
  • Il profilo della fluorescenza FM1-43 per vari trattamenti assomiglia a quello dell’esposizione alla fosfatidilserina riportata dall’annessina V-FITC. FM1-43 ha rilevato l’inizio dello scrambling in modo più efficiente rispetto all’annessina V-FITC. Il rimescolamento indotto da anfifili ha dimostrato di essere un processo indipendente da Ca(2+). Il monitoraggio dello scrambling nelle cellule K562 causate dal rilascio di Ca(2+) indotto da NEM dai depositi intracellulari e dal trattamento con Ca(2+) e ionoforo A23187 ha mostrato che l’aumento della fluorescenza FM1-43 era ben correlato al numero di annessina V- Cellule fosfatidilserina-positive rilevate da FITC. I risultati qui presentati mostrano l’utilità di FM1-43 come un marcatore Ca(2+)-indipendente di dissipazione nella distribuzione asimmetrica dei fosfolipidi di membrana indotta da vari stimoli in cellule sia nucleate che non nucleate.

Studio fluorometrico dell’asimmetria fosfolipidica della membrana della testa dello sperma di coniglio durante la capacitazione e la reazione acrosomiale utilizzando  l’Annessina –  FITC .

  1. Questo studio è stato condotto per valutare la traslocazione della fosfatidilserina nella membrana plasmatica della testa del gradiente di Percoll purificato dallo sperma dell’epididimo cauda del coniglio durante la capacitazione e la reazione acrosomiale (AR) utilizzando l’Annessina-V. Lo ioduro di propidio è stato utilizzato come controllo per respingere le cellule morte o morenti.
  2. La presenza e la distribuzione dei siti di legame dell’annessina-V sono state analizzate mediante fluorocitometria a flusso e microscopia confocale. Dopo 6 h di incubazione dello sperma nel mezzo di capacitazione, il numero di cellule colorate positivamente con l’annessina-V ha mostrato un piccolo ma significativo incremento.
  3. I siti di legame dell’annessina-V prodotti durante la capacitazione sono stati trovati principalmente nella regione post-acrosomale della membrana plasmatica della testa dello sperma.
  4. Dopo l’induzione di AR con progesterone, la localizzazione della fosfatidilserina è stata modificata e i siti di legame dell’Annessina-V sono stati trovati quasi solo nella regione acrosomiale, ma con un numero maggiore di siti di legame nell’area equatoriale. Al contrario, dopo l’induzione di AR con A23187, la traslocazione della fosfatidilserina, sebbene predominante sulla regione acrosomiale, è stata osservata anche nella regione post-acrosomale.
  5. La destabilizzazione della membrana plasmatica durante la capacitazione e l’AR possono essere importanti per la fusione spermatozoo-ovocita.

Analisi confocale dell’esternalizzazione della fosfatidilserina con l’uso dell’annessina V biotinilata  rivelata  con  streptavidina – FITC , -europio, -ficoeritrina o -Texas Red in cellule apoptotiche trattate con ossisterolo.

  • Per analizzare l’esternalizzazione della fosfatidilserina tramite l’annessina V su cellule apoptotiche mediante microscopia confocale a scansione laser e analisi fattoriale di sequenze di immagini biomediche (FAMIS).
  • Streptavidina-fluoresceina isotiocianato (FITC), -europio (Eu), -ficoeritrina (PE) e -Texas Red (TR) sono stati scelti per rivelare il legame dell’annessina V biotinilata su cellule leucemiche umane U937 apoptotiche e cellule endoteliali umane ECV-304 indotte in trattamento con 7-chetocolesterolo o 7 beta-idrossicolesterolo. L’eccitazione di ciascun fluorocromo è stata ottenuta mediante la selezione di linee specifiche (351 + 364 nm, 488 nm) del laser ad argon di un microscopio confocale. Sono state eseguite serie temporali e spettrali per caratterizzare ciascun fluorocromo. FAMIS è stato applicato a queste serie per stimare le immagini corrispondenti alle macchie.
  • Ciascun fluorocromo è stato chiaramente distinto e le immagini hanno mostrato la localizzazione della fosfatidilserina, che è stata migliorata dall’analisi dell’immagine.

Annexin V Apoptosis Detection Kit (FITC)

abx290002-100test Abbexa 100 test 537 EUR

Annexin V Apoptosis Detection Kit (FITC)

abx290014-200test Abbexa 200 test 481 EUR

Annexin V-FITC Apoptosis Kit Plus

K2057-100 ApexBio 100 assays 516 EUR

Annexin V-FITC Apoptosis Kit Plus

K2057-25 ApexBio 25 assays 251 EUR

Annexin V-FITC Apoptosis Kit Plus

K2057-400 ApexBio 400 assays 1059 EUR

Annexin V-FITC Apoptosis Kit Plus

K201-100 Biovision 501 EUR

Annexin V-FITC Apoptosis Kit Plus

K201-25 Biovision 240 EUR

Annexin V-FITC Apoptosis Kit Plus

K201-400 Biovision 947 EUR

Annexin V Apoptosis Detection Kit (FITC)

55R-1265 Fitzgerald 25 assays 277 EUR

Annexin V, Recombinant

20014 AAT Bioquest 100 ug 219 EUR

Annexin V, Recombinant

20015 AAT Bioquest 1 mg 702 EUR

Annexin V PE

EXB0027 ExBio 100 tests 204 EUR

Annexin V APC

EXB0028 ExBio 100 tests 204 EUR

Annexin V, CF770

29046 Biotium 25ug 342 EUR

Annexin V, CF790

29047 Biotium 25ug 366 EUR

Annexin V siRNA

20-abx907673 Abbexa
  • 551.00 EUR
  • 732.00 EUR
  • 15 nmol
  • 30 nmol

Annexin V siRNA

20-abx907674 Abbexa
  • 551.00 EUR
  • 732.00 EUR
  • 15 nmol
  • 30 nmol

Annexin V siRNA

20-abx900343 Abbexa
  • 551.00 EUR
  • 732.00 EUR
  • 15 nmol
  • 30 nmol

Annexin V (PE)

abx090613-100tests Abbexa 100 tests 537 EUR

Annexin V (APC)

abx090615-100tests Abbexa 100 tests 599 EUR

Annexin V Antibody

49376-100ul SAB 100ul 333 EUR

Annexin V Antibody

49376-50ul SAB 50ul 239 EUR

Annexin V antibody

PAab09988 Lifescience Market 100 ug 386 EUR

anti-Annexin V

YF-PA10225 Abfrontier 50 ug 363 EUR

anti-Annexin V

YF-PA10226 Abfrontier 100 ul 403 EUR

anti-Annexin V

YF-PA10227 Abfrontier 100 ug 403 EUR

Annexin V Antibody

3357-100 Biovision 387 EUR

Annexin V Antibody

3357-30T Biovision 146 EUR

anti-Annexin V

YF-PA23217 Abfrontier 50 ul 334 EUR

Annexin V antibody

20R-1522 Fitzgerald 100 ug 651 EUR

Annexin V antibody

10R-7939 Fitzgerald 100 ug 430 EUR

Annexin V antibody

70R-11770 Fitzgerald 100 ug 527 EUR

Annexin V antibody

70R-13691 Fitzgerald 100 ug 322 EUR

Annexin V (FITC) / PI Apoptosis Detection Kit

abx090601-100tests Abbexa 100 tests 460 EUR

Annexin V / PI Apoptosis Detection Kit (FITC)

abx290007-100test Abbexa 100 test 453 EUR

Annexin V / 7ADD Apoptosis Detection Kit (FITC)

abx290008-100test Abbexa 100 test 453 EUR

Aposcreen Annexin V Apoptosis Kit : FITC (OKSB00007)

OKSB00007 Aviva Systems Biology 100 Tests 513 EUR

Annexin V Apoptosis Detection Kit : FITC (OKTA00003)

OKTA00003 Aviva Systems Biology KIT 317 EUR

Annexin V-FITC/PI Apoptosis Detection Kit

A211-01 Vazyme 50 rxn 216 EUR

Annexin V-FITC/PI Apoptosis Detection Kit

A211-02 Vazyme 100 rxn 295 EUR

Annexin V Apoptosis Detection Kit Plus (FITC)

55R-1302 Fitzgerald 25 assays 296 EUR

Annexin V, sulforhodamine 101 conjugate (Texas-Red Annexin V)

29002 Biotium 0.5ML 277 EUR

Annexin V (FITC) / 7-AAD Apoptosis Detection Kit

abx090603-100tests Abbexa 100 tests 495 EUR

Annexin V-FITC / PI Cell Apoptosis Detection Kit

20-abx098246 Abbexa
  • 244.00 EUR
  • 314.00 EUR
  • 25 rxns
  • 50 rxns

Annexin V-Cy5 conjugate

20066 AAT Bioquest 100 Tests 219 EUR

Annexin V-Cy7 conjugate

20068 AAT Bioquest 100 Tests 219 EUR

Annexin V, AF350 conjugate

20090 AAT Bioquest 100 tests 219 EUR

Annexin V, AF488 conjugate

20092 AAT Bioquest 100 tests 219 EUR

Annexin V, AF594 conjugate

20096 AAT Bioquest 100 tests 219 EUR

Recombinant Annexin V (ANXA5)

4-RPA259Hu02 Cloud-Clone
  • 476.32 EUR
  • 230.00 EUR
  • 1511.20 EUR
  • 570.40 EUR
  • 1040.80 EUR
  • 382.00 EUR
  • 3628.00 EUR
  • 100 ug
  • 10ug
  • 1 mg
  • 200 ug
  • 500 ug
  • 50ug
  • 5 mg

Active Annexin V (ANXA5)

4-APA259Ra01 Cloud-Clone
  • 619.68 EUR
  • 269.00 EUR
  • 2048.80 EUR
  • 749.60 EUR
  • 1399.20 EUR
  • 478.00 EUR
  • 4972.00 EUR
  • 100 ug
  • 10ug
  • 1 mg
  • 200 ug
  • 500 ug
  • 50ug
  • 5 mg

Annexin V Dyomics 647

EXB0023 ExBio 100 tests 222 EUR

Annexin V Polyclonal Antibody

27222-100ul SAB 100ul 252 EUR

Annexin V Polyclonal Antibody

27222-50ul SAB 50ul 187 EUR

Annexin V (ANXA5) Antibody

20-abx121016 Abbexa
  • 300.00 EUR
  • 439.00 EUR
  • 189.00 EUR
  • 100 ul
  • 200 ul
  • 30 ul

Annexin V (ANXA5) Antibody

20-abx109257 Abbexa
  • 411.00 EUR
  • 1845.00 EUR
  • 599.00 EUR
  • 182.00 EUR
  • 300.00 EUR
  • 100 ug
  • 1 mg
  • 200 ug
  • 20 ug
  • 50 ug

Annexin V (ANXA5) Antibody

20-abx109540 Abbexa
  • 411.00 EUR
  • 1845.00 EUR
  • 599.00 EUR
  • 182.00 EUR
  • 300.00 EUR
  • 100 ug
  • 1 mg
  • 200 ug
  • 20 ug
  • 50 ug

Annexin V (ANXA5) Antibody

20-abx110998 Abbexa
  • 732.00 EUR
  • 398.00 EUR
  • 150 ul
  • 50 ul

Annexin V, CF647 conjugate

29003 Biotium 0.5ML 307 EUR

Annexin V, CF555 conjugate

29004 Biotium 0.5ML 307 EUR

Annexin V, CF488A conjugate

29005 Biotium 0.5ML 307 EUR

Annexin V, CF750 conjugate

29006 Biotium 25ug 342 EUR

Annexin V, CF680 conjugate

29007 Biotium 25ug 342 EUR

Annexin V, CF633 conjugate

29008 Biotium 0.5ML 307 EUR

Annexin V, CF405M conjugate

29009 Biotium 0.5ML 307 EUR

Annexin V, CF568 conjugate

29010 Biotium 0.5ML 307 EUR

Annexin V, CF594 conjugate

29011 Biotium 0.5ML 307 EUR

Annexin V, CF350 conjugate

29012 Biotium 0.5mL 307 EUR

Annexin V, Biotin conjugate

29013 Biotium 0.5mL 307 EUR

Annexin V, CF640R conjugate

29014 Biotium 0.5mL 307 EUR

Annexin V, CF660R conjugate

29069 Biotium 0.5mL 311 EUR

Annexin V, CF680R conjugate

29070 Biotium 25ug 344 EUR

Annexin V, CF800 conjugate

29078 Biotium 25ug 367 EUR

Annexin V, CF700 conjugate

29082 Biotium 25ug 357 EUR

Annexin V, CF450 conjugate

29083 Biotium 0.5mL 303 EUR

Annexin V (ANXA5) Antibody

20-abx001443 Abbexa
  • 411.00 EUR
  • 592.00 EUR
  • 182.00 EUR
  • 314.00 EUR
  • 100 ul
  • 200 ul
  • 20 ul
  • 50 ul

Annexin V Binding Buffer

abx090621-100tests Abbexa 100 tests 286 EUR

Annexin V (ANXA5) Antibody

abx038319-100ug Abbexa 100 ug 391 EUR

Annexin V (ANXA5) Antibody

abx037408-100ug Abbexa 100 ug 391 EUR

Annexin V (ANXA5) Antibody

abx032878-400ul Abbexa 400 ul 523 EUR

Annexin V (ANXA5) Antibody

abx032878-80l Abbexa 80 µl 286 EUR

Annexin V (ANXA5) Antibody

abx032879-400ul Abbexa 400 ul 523 EUR

Annexin V (ANXA5) Antibody

abx032879-80l Abbexa 80 µl 286 EUR

Annexin V (ANXA5) Antibody

abx412125-01mg Abbexa 0.1 mg 899 EUR

Annexin V (ANXA5) Antibody

abx414511-01mg Abbexa 0.1 mg 439 EUR

Annexin V Blocking Peptide

20-abx161016 Abbexa
  • 272.00 EUR
  • 411.00 EUR
  • 1 mg
  • 5 mg

Annexin V (ANXA5) Antibody

abx230436-100ug Abbexa 100 ug 481 EUR

Annexin V (ANXA5) Antibody

abx230437-100ug Abbexa 100 ug 481 EUR

 

Sulle cellule apoptotiche è possibile analizzare le differenze nella migliore visualizzazione della fosfatidilserina in serie elaborate da FAMIS con l’uso dell’annessina V biotinilata rivelata con streptavidina-FITC, -Eu, -PE o -TR