Sondare la nanoelettroporazione e richiudere la membrana cellulare mediante penetrazione di ioni Ca2+ e Ba2+.

1. Il principale effetto biologico di un campo elettrico pulsato di nanosecondi (nsPEF) è la permeabilizzazione permanente della membrana cellulare, che è spesso attribuita alla formazione di pori di dimensioni nanometriche. Tali pori possono essere troppo piccoli per essere rilevati dall’assorbimento di coloranti fluorescenti. Abbiamo esaminato se gli ioni Ca  ²⁺  , Cd  ²⁺  , Zn  ²⁺  e Ba  ²⁺   potessero essere usati come marcatori di nanoporazione. L’imaging time-lapse  è stato eseguito in cellule CHO, BPAE e HEK caricate con coloranti Fluo-4,   Calbryte  o Fluo-8. Ca  ²⁺   e Ba  ²⁺   non hanno modificato la fluorescenza nelle cellule intatte mentre il loro ingresso dopo nsPEF ha aumentato la fluorescenza in <1 ms.
2. La soglia per un impulso di 300 ns era 1,5-2 kV/cm, significativamente inferiore a > 7 kV/cm per la formazione di pori più grandi che consentivano al colorante YO-PRO-1, TO-PRO-3 o propidio di entrare nel interno. cellule. L’immissione di Ba  ²⁺   ha comportato un graduale aumento delle emissioni che hanno raggiunto un livello stabile entro 2 minuti o, con un nsPEF più intenso, sono aumentate continuamente per almeno 30 minuti. L’ ingresso  di Ca ²⁺   potrebbe indurre il rilascio di calcio indotto dal calcio (CICR) e la successiva rimozione di Ca  ²⁺   dal citosol, che ha influenzato significativamente l’andamento temporale, la polarizzazione, l’ampiezza e la dose-dipendenza del cambiamento della fluorescenza. Sia Ca  ²⁺  che Ba  ²⁺   si sono rivelati marcatori sensibili di nanoporazione, con Ba  ²⁺  è più affidabile nel monitoraggio del danneggiamento del diaframma e della richiusura.

Valutazione dell’effetto della caliculina A sulla formazione di focolai γH2AX / 53BP1 e apoptosi nei linfociti del sangue ombelicale umano

• L’inibitore della defosforilazione caliculin A (  cal   A) inibisce la scomparsa dei focolai di riparazione del DNA γH2AX indotti dalle radiazioni nei linfociti umani  . Tuttavia, altri studi non hanno mostrato cambiamenti nella cinetica di induzione e perdita del focus γH2AX nelle cellule irradiate. Sebbene l’apoptosi possa interagire con la cinetica di formazione dei focolai, non è stata osservata nelle cellule irradiate insieme ai focolai di riparazione del DNA. Pertanto, per confermare una spiegazione plausibile per la variabilità significativa nei risultati di questi studi, abbiamo valutato l’effetto di   cal   A (1 e 10 nM) sui focolai di riparazione del DNA γH2AX / 53BP1 e sull’apoptosi dell’irradiato (1, 5, 10, e 100 cGy)  cordoni   ombelicali umani.linfociti del sangue (UCBL) mediante microscopia a fluorescenza automatizzata e colorazione con annessina V-FITC / ioduro di propidio / γH2AX, rispettivamente.
• Non vi è stato alcun effetto di   cal   A su γH2AX e  focolai γH2AX / 53BP1 colocalizzati  indotti da basse dosi (≤10 cGy) di raggi γ. Inoltre, il trattamento con 10 nM   cal   A ha ridotto il numero di tutti i tipi di focolai di riparazione del DNA indotti dall’irradiazione di 100 cGy. 10 nM   cal   Apoptosi indotta dal trattamento dopo appena 2 ore di trattamento, indipendentemente dalla dose somministrata. L’apoptosi è stata rilevata anche nell’UCBL trattata con una   concentrazione inferiore di  kali A, 1 nM, con un’incubazione più lunga delle cellule, 20 e 44 ore. I nostri dati suggeriscono che l’apoptosi indotta   da cal A   nell’UCBL potrebbe essere la causa del fallimento del   cal E al fine di mantenere i fuochi γH2AX indotti dalle radiazioni. Tutti i marcatori molecolari DSB utilizzati in questo studio hanno risposto in modo lineare all’irradiazione a basse dosi. Pertanto, la loro combinazione può fornire un potente strumento di bioimetria per valutare la risposta alle radiazioni a basse dosi. La valutazione del  γH2AX  / 53BP1 colocalizzato ha migliorato la soglia per il rilevamento di basse dosi.

LOCALIZZAZIONE DEI TAGLIO CIRCOLARE MEDIANTE ESPERIMENTI LASER E CALCOLI AB INITIO.

I NUOVI SULFONYL CHROMEN-4-ONES (CHW09) UCCIDONO PREFERIBILMENTE LE CELLULE DEL CANCRO ORALE CHE MOSTRANO APOPTOSI, STRESS OSSIDATIVO E DANNI AL DNA.