A new mathematical model for relative quantification in real-time RT-PCR.BlogOne-step inactivation of chromosomal genes in Escherichia coli K-12 using PCR products.

Metodo rapido, sensibile e specifico per rilevare il virus nano del riso mediante ibridazione Northern blot

  1. Basato sulla stabilità dell’RNA a doppio filamento (ds), è stato sviluppato un metodo nuovo, veloce, sensibile e specifico per rilevare il dsRNA del virus genomico nano del riso (RDV) mediante ibridazione molecolare.
  2. Contrariamente all’analisi Northern blot standard comunemente usata, il dsRNA viene denaturato sulla macchia nello stato immobilizzato. Pertanto,  il rischio di degradazione dell’RNA a filamento singolo (ss) da parte della ribonucleasi (RNasi) durante la preparazione del campione, l’elettroforesi e il blotting viene eliminato.
Questo metodo supera lo svantaggio della denaturazione incompleta del dsRNA nell’analisi Northern blot. Nel complesso, il metodo appena sviluppato è affidabile, sensibile, molto specifico e di basso livello. L’intera procedura richiede anche meno tempo; può essere fatto in 2-3 giorni. Il nuovo metodo può essere considerato una modifica dell’analisi standard del Northern blot.

Applicazione del test di screening Falcon – test di immunoassorbimento enzimatico (  FAST  -ELISA) e   blot di immunoelettrotransfer enzimatico   (EITB) per determinare l’incidenza della fasciolisi nell’uomo nell’altopiano boliviano

  • Uno studio congiunto della School of Medicine dell’Università di Porto Rico, del Center for Disease Control, del Ministero della Salute boliviano e di organizzazioni di volontariato private (Foster Parents Plan International e Danchurchaid) che operano in Bolivia ha identificato una regione nel nord-ovest dell’Altiplano boliviano vicino a Il lago Titicaca come l’habitat di maggior prevalenza di fascioliasi nelle popolazioni del mondo. Per determinarne la frequenza sono state utilizzate due tecniche sierologiche (test di immunoassorbimento enzimatico Falcon test [FAST-ELISA] e immunoelettrotransfer blot legato a enzimi [EITB]).
  • Cento campioni di siero e 73 campioni di feci sono stati ottenuti dagli indiani Aymara di Corapata, in Bolivia. I livelli di assorbimento dell’anticorpo per gli antigeni di eliminazione della secrezione di Fasciola hepatica sono stati confrontati con i  modelli di bande EITB utilizzando la stessa preparazione dell’antigene. Un FAST-ELISA positivo è stato definito come il valore di assorbanza maggiore  della media più tre deviazioni standard dei due gruppi di controlli negativi normali (portoricano e boliviano).
  • Utilizzando questo criterio, 53 su 100 sieri testati sono risultati positivi con questa tecnica. In questo gruppo, 19 (95%) delle 20 persone che avevano parassiti sono risultate positive anche al test FAST-ELISA. Anche altri 24 soggetti che non hanno ricevuto uova di F. hepatica e 10 che non hanno ricevuto alcun campione sono risultati positivi al test FAST-ELISA. Delle 53 uova di F. hepatica negative, 29 erano anche FAST-ELISA negative. L’analisi EITB dei sieri di individui infetti confermati ha rivelato almeno tre bande di F. hepatica (Fh) con pesi molecolari rispettivamente di 12, 17 e 63 kD. (ASTRATTO DISEGNATO A 250 PAROLE).

IMMUNODIAGNOSTICA DELLA DRACUNCULISI MEDIANTE IL TEST FALCON-SAGGIO IMMUNOSORBENTE LEGATO A ENZIMI (  FAST  -ELISA) E LA TECNICA DI IMMUNO ELETTROTRASFERIMENTO ENZYMATICO (EITB)  .

  1. Lo screening dell’immunosorbente legato all’enzima del test Falcon (FAST-ELISA) e la tecnica enzimatica immunoelectrotransfer blot (EITB) sono stati utilizzati per testare sieri umani con l’antigene Dracunculus medinensis adulto per valutarne il potenziale valore nell’immunodiagnosi della dacuncolosi. I sieri umani utilizzati sono stati ottenuti da pazienti con infezione da D. medinensis pre-brevetto e brevettata o da pazienti infetti da altri nematodi (Onchocerca volvulus e Loa loa) o trematodi (Schistosoma mansoni e S. haematobium) nonché da nigeriani normali non infetti e Controlli portoricani. Nel test FAST-ELISA, i sieri di pazienti con dracunculiasi in prepatenza e brevetto hanno fornito i valori di assorbimento più elevati rispetto ai normali sieri umani.
  2. La maggiore reattività crociata è stata osservata con sieri da oncocercosi; Nessuna reattività crociata è stata osservata con i sieri di individui con schistosomiasi o ematobia loase o mansoni. Secondo l’EITB, i sieri di pazienti con draculosi hanno riconosciuto specificamente la proteina 16 kDa (Dm 16) e gli anticorpi anti-Dm 16 sono scomparsi 2 mesi dopo l’estrazione del verme. Dm 16 è stato diagnosticato dalla fase pre-patente tardiva. La proteina 17 kDa (Dm 17) è stata riconosciuta anche dai sieri di dracunculiasi, ma gli anticorpi anti-Dm 17 sono scomparsi più lentamente ed erano presenti 1 anno dopo il recupero. Gli antigeni D. medinensis da 16 kDa e 17 kDa possono essere utili nell’immunodiagnosi della dracuncolosi.

Quantificazione delle proteine ​​su gel e blot mediante fluorescenza infrarossa Coomassie Blue e Fast Green.

  1. La colorazione blu di Coomassie di gel e blot è ampiamente utilizzata per il rilevamento e la quantificazione delle proteine ​​mediante densitometria. Abbiamo scoperto che Coomassie Blue o Fast Green FCF si legano alle proteine ​​fluorescenti del vicino infrarosso. Abbiamo utilizzato questa proprietà per  sviluppare un metodo rapido e sensibile per rilevare e quantificare le proteine ​​in gel e blot  .
  2. La risposta di fluorescenza è quantificata per un contenuto proteico da 10 ng a 20 microg per banda o spot. La colorazione e la decolorazione richiedono solo 30 minuti e il metodo è compatibile con la successiva immunorilevazione.

Tecnica modificata di western  blot per il  rilevamento rapido   dell’eme ossigenasi (HO-1 / HO-2) in vari tessuti e organi di animali da esperimento

  • Lo scopo di questo studio era definire tutte le condizioni necessarie per la rilevazione dell’eme ossigenasi (HO) mediante la tecnica del western blot. Il nostro metodo di immunoblotting modificato ha consentito di rilevare HO dopo 2 ore di elettrotrasferimento su membrane di nitrocellulosa, che evidentemente ha ridotto  i tempi di test senza perdere la sensibilità e la specificità nel rilevare HO in vari tessuti e organi di animali da esperimento.
  • HO è stato rilevato nel cervello, cuore, rene, fegato, polmone, milza, testicoli e timo del topo e del ratto testati in una quantità che fornisce la prova che questa tecnica di immunoblotting modificata è sufficientemente sensibile da indurre l’esistenza di questo enzima in vari tessuti e organi degli animali. In conclusione, il nostro metodo Western blot modificato consente il rilevamento rapido di HO, che può essere utile per ulteriori ricerche quantitative più avanzate.

Rapid    Western   blot  migliorato per la quantificazione mediante etichettatura a fluorescenza diretta degli anticorpi primari

  1. Le procedure Western blot esistono da molto tempo e i recenti progressi hanno aumentato la sensibilità delle tecniche di luminescenza in modo tale che la necessità di sonde radioattive è stata limitata a poche applicazioni. Tuttavia, la maggior parte dei protocolli richiede più di 6 ore e spesso richiede più di un giorno. La maggior parte delle tecniche richiede un anticorpo secondario coniugato a un enzima che catalizza una reazione cromatica per migliorare un segnale rilevabile. Tuttavia, entrambi i processi, il legame dell’anticorpo secondario e la reazione catalizzata con il colorante, sono  fonti di errore, quest’ultima essendo svantaggiosa per un segnale che è lineare nell’intervallo più ampio dell’antigene rilevato.
  2. Al fine di migliorare la procedura più comunemente utilizzata per quantificazione e convenienza, abbiamo studiato l’uso dell’etichettatura fluorescente di anticorpi monoclonali primari contro le subunità della RNA polimerasi di Escherichia coli (beta ‘, sigmaE e sigmaFecI) e il loro uso nell’analisi Western blot. Abbiamo ottenuto una sensibilità (<1 ng di proteina rilevabile) paragonabile alla maggior parte delle tecniche luminescenti.

FPI-1465

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EZFIT/ZNF71 (anti EZFIT antibody, clone# K9716)

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TRAb-AE

E4A09K01-DBZ-TAE EnoGene 50ug 275 EUR

Cytokeratin pan(AE-1 / AE-3) Antibody

BNCH0371-100 Biotium 100uL 238.8 EUR

Cytokeratin pan(AE-1 / AE-3) Antibody

BNCH0371-500 Biotium 500uL 652.8 EUR

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BNC700371-100 Biotium 100uL 238.8 EUR

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BNC700371-500 Biotium 500uL 652.8 EUR

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Cytokeratin pan(AE-1 / AE-3) Antibody

BNC810371-100 Biotium 100uL 238.8 EUR

Cytokeratin pan(AE-1 / AE-3) Antibody

BNC810371-500 Biotium 500uL 652.8 EUR

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BNC550371-100 Biotium 100uL 238.8 EUR

Cytokeratin pan(AE-1 / AE-3) Antibody

BNC550371-500 Biotium 500uL 652.8 EUR

Cytokeratin pan(AE-1 / AE-3) Antibody

BNC430371-100 Biotium 100uL 238.8 EUR

Cytokeratin pan(AE-1 / AE-3) Antibody

BNC430371-500 Biotium 500uL 652.8 EUR

Cytokeratin pan(AE-1 / AE-3) Antibody

BNC610371-100 Biotium 100uL 238.8 EUR

Cytokeratin pan(AE-1 / AE-3) Antibody

BNC610371-500 Biotium 500uL 652.8 EUR

Cytokeratin pan(AE-1 / AE-3) Antibody

BNC050371-100 Biotium 100uL 238.8 EUR

Cytokeratin pan(AE-1 / AE-3) Antibody

BNC050371-500 Biotium 500uL 652.8 EUR

Cytokeratin pan(AE-1 / AE-3) Antibody

BNCA0371-250 Biotium 250uL 459.6 EUR

Cytokeratin pan(AE-1 / AE-3) Antibody

BNCAP0371-100 Biotium 100uL 238.8 EUR

Cytokeratin pan(AE-1 / AE-3) Antibody

BNCAP0371-500 Biotium 500uL 652.8 EUR

Cytokeratin pan(AE-1 / AE-3) Antibody

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Cytokeratin pan(AE-1 / AE-3) Antibody

BNCR0371-250 Biotium 250uL 459.6 EUR

Monoclonal Cytokeratin, pan (Epithelial Marker) Mouse Monoclonal Antibody [Clone AE-1/AE-3], Clone: AE-1/AE-3

APR15662G Leading Biology 0.1 ml 580.8 EUR

Cytokeratin, pan(AE-1 / AE-3), 1mg/mL

BNUM0371-50 Biotium 50uL 396 EUR

Cytokeratin, pan(AE-1 / AE-3), 0.2mg/mL

BNUB0371-100 Biotium 100uL 225 EUR

Cytokeratin, pan(AE-1 / AE-3), 0.2mg/mL

BNUB0371-500 Biotium 500uL 485 EUR

AE-1460 EzBlot

2332600 Atto 2unit 94.34 EUR

AE-1490 EzWestBlue

2332630 Atto 2unit 94.34 EUR

AE-6530MW mPAGE

2321915 Atto 1unit 545.38 EUR

AE-1410 EzRun

2332310 Atto 5unit 38.32 EUR

AE-1412 EzRunC+

2332320 Atto 2unit 94.34 EUR

AE-1412S EzRunC+

2332321 Atto each 86.97 EUR

AE-1415 EzRunT

2332325 Atto 3unit 81.07 EUR

AE-1430 EzApply

2332330 Atto 3unit 57.49 EUR

AE-1435 EzApply2Dkit

2332335 Atto 2unit 147.4 EUR

AE-1440 EzStandard

2332340 Atto 3unit 81.07 EUR

ONO-AE-248

T28252-10mg TargetMol Chemicals 10mg Ask for price

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T28252-5mg TargetMol Chemicals 5mg Ask for price

Poricoic acid AE

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TN4817-50mg TargetMol Chemicals 50mg Ask for price

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TN4817-5mg TargetMol Chemicals 5mg Ask for price

Cytokeratin, pan(AE-1 / AE-3), CF594 conjugate, 0.1mg/mL

BNC940371-100 Biotium 100uL 192 EUR

Cytokeratin, pan(AE-1 / AE-3), CF594 conjugate, 0.1mg/mL

BNC940371-500 Biotium 500uL 532 EUR

Cytokeratin, pan(AE-1 / AE-3), CF488A conjugate, 0.1mg/mL

BNC880371-100 Biotium 100uL 192 EUR

Cytokeratin, pan(AE-1 / AE-3), CF488A conjugate, 0.1mg/mL

BNC880371-500 Biotium 500uL 532 EUR

Cytokeratin, pan(AE-1 / AE-3), CF647 conjugate, 0.1mg/mL

BNC470371-100 Biotium 100uL 192 EUR

Cytokeratin, pan(AE-1 / AE-3), CF647 conjugate, 0.1mg/mL

BNC470371-500 Biotium 500uL 532 EUR

Cytokeratin, pan(AE-1 / AE-3), CF568 conjugate, 0.1mg/mL

BNC680371-100 Biotium 100uL 192 EUR

Cytokeratin, pan(AE-1 / AE-3), CF568 conjugate, 0.1mg/mL

BNC680371-500 Biotium 500uL 532 EUR

Cytokeratin, pan(AE-1 / AE-3), CF405S conjugate, 0.1mg/mL

BNC040371-100 Biotium 100uL 192 EUR

Cytokeratin, pan(AE-1 / AE-3), CF405S conjugate, 0.1mg/mL

BNC040371-500 Biotium 500uL 532 EUR

Cytokeratin, pan(AE-1 / AE-3), CF405L conjugate, 0.1mg/mL

BNC060371-100 Biotium 1uL 192 EUR

Cytokeratin, pan(AE-1 / AE-3), CF405L conjugate, 0.1mg/mL

BNC060371-500 Biotium 1uL 532 EUR

Cytokeratin, pan(AE-1 / AE-3), CF640R conjugate, 0.1mg/mL

BNC400371-100 Biotium 100uL 192 EUR

Cytokeratin, pan(AE-1 / AE-3), CF640R conjugate, 0.1mg/mL

BNC400371-500 Biotium 500uL 532 EUR

Cytokeratin, pan(AE-1 / AE-3), Biotin conjugate, 0.1mg/mL

BNCB0371-100 Biotium 100uL 192 EUR

Cytokeratin, pan(AE-1 / AE-3), Biotin conjugate, 0.1mg/mL

BNCB0371-500 Biotium 500uL 532 EUR

Cytokeratin, Pan (Epithelial Marker); Clone AE-1 & AE-3 (Concentrate)

RA0382-C.1 ScyTek Laboratories 0.1 ml 60.07 EUR

Cytokeratin, Pan (Epithelial Marker); Clone AE-1 & AE-3 (Concentrate)

RA0382-C.5 ScyTek Laboratories 0.5 ml 200.66 EUR

Anti-Cytokeratin Antibody Clone AE-1/AE-3, Unconjugated-100ug

MSM2-371-P1 EnQuireBio 100ug 513.6 EUR

AE-6935B Visirays-B

2008001 Atto 1unit 1842.5 EUR

AE-6935GS Visirays-GS

2008011 Atto 1unit 1842.5 EUR

AE-6935GL Visirays-GL

2008012 Atto 1unit 1842.5 EUR

AE-1475 EzBlock Chemi

2332615 Atto 3unit 66.33 EUR

AE-1476 EzBlock BSA

2332616 Atto 3unit 66.33 EUR

AE-1477 EzBlock CAS

2332617 Atto 3unit 9900 EUR

Spring Set , AE-6220

2392051 Atto 5unit 19.9 EUR

AE-6530M mPAGE Chamber

2321900 Atto 1unit 353.76 EUR

AE-6530P mPAGE Chamber

2321905 Atto 1unit 353.76 EUR

Dummy plate, AE-6220

2328796 Atto 3unit 44.22 EUR

AE-1411 EzRun 5L

2332311 Atto each 81.07 EUR

AE-1477 EzBlock CAS

2332317 Atto each 66.33 EUR

AE-1440-2 EzStandard

2332345 Atto 2unit 154.77 EUR

AE-1450 EzStandard prestainBlue

2332347 Atto 2unit 109.08 EUR

AE-1310 EzStain reverse

2332350 Atto 2unit 123.82 EUR

AE-1360 EzStain silver

2332360 Atto 2unit 18480 EUR

AE-1340 EzStain AQua

2332370 Atto 3unit 78.12 EUR

AE-1390 SDS-eliminant

2332390 Atto 2unit 103.18 EUR

AE-1360 EzStain silver

3521360 Atto each 123.82 EUR

AE-1 Cell Line

CL-0471 Elabscience Biotech 1×10⁶ cells/vial 500 EUR

AE-2 Cell Line

CL-0472 Elabscience Biotech 1×10⁶ cells/vial 500 EUR

Anti-AE 1 Antibody

HA500323 HUABIO 100ul 189 EUR

Dibenzo(ae)pyrene - 1ML

S-1200 Scientific Laboratory Supplies 1ML 99.9 EUR

PC ae C40:6

P488620 Toronto Research Chemicals 100mg 9200 EUR

Olfr1465 (untagged) - Mouse olfactory receptor 1465 (Olfr1465), (10ug)

MC213386 Origene Technologies GmbH 10 µg Ask for price

Recombinant Streptococcus Pyogenes polC Protein (aa 1-1465)

VAng-Cr8154-inquire Creative Biolabs inquire Ask for price

Monoclonal Cytokeratin, pan (Epithelial Marker) Antibody, Clone: AE-1/AE-3

APR14634G Leading Biology 0.1 ml at 0.1mg/ ml 580.8 EUR

Monoclonal Cytokeratin, pan (Epithelial Marker) Antibody, Clone: AE-1/AE-3

APR14635G Leading Biology 7 ml 580.8 EUR

Olfr1465 (GFP-tagged) - Mouse olfactory receptor 1465 (Olfr1465), (10ug)

MG213661 Origene Technologies GmbH 10 µg Ask for price

Olfr1465 (Myc-DDK-tagged) - Mouse olfactory receptor 1465 (Olfr1465)

MR213661 Origene Technologies GmbH 10 µg Ask for price

AE-6200 Slab EP Chamber

2392985 Atto 1unit 552.75 EUR

Gel carrier for AE-6541

2394140 Atto 10unit 13.27 EUR

AE-6111 Agarose EP Kit

2322178 Atto 1unit 663.3 EUR

AE-1340L EzStain Aqua 5L

2332371 Atto each 353.76 EUR

AE-1340LL EzStain Aqua 10L

2332372 Atto each 663.3 EUR

Band 3/AE 1 Antibody

DF7843 Affbiotech 200ul 420 EUR

Band 3/AE 1 Antibody

DF7843-100ul Affinity Biosciences 100ul 280 EUR

Band 3/AE 1 Antibody

DF7843-200ul Affinity Biosciences 200ul 350 EUR

Cytokeratin LMW(AE-1) Antibody

BNCD0253-100 Biotium 100uL 238.8 EUR

Cytokeratin LMW(AE-1) Antibody

BNCD0253-500 Biotium 500uL 652.8 EUR

Cytokeratin HMW(AE-3) Antibody

BNCD0257-100 Biotium 100uL 238.8 EUR

Cytokeratin HMW(AE-3) Antibody

BNCD0257-500 Biotium 500uL 652.8 EUR

Histone H1(AE-4) Antibody

BNCH0096-100 Biotium 100uL 238.8 EUR

Histone H1(AE-4) Antibody

BNCH0096-500 Biotium 500uL 652.8 EUR

Cytokeratin LMW(AE-1) Antibody

BNCH0253-100 Biotium 100uL 238.8 EUR

Cytokeratin LMW(AE-1) Antibody

BNCH0253-500 Biotium 500uL 652.8 EUR

Cytokeratin HMW(AE-3) Antibody

BNCH0257-100 Biotium 100uL 238.8 EUR

Cytokeratin HMW(AE-3) Antibody

BNCH0257-500 Biotium 500uL 652.8 EUR

Nuclear Membrane(AE-5) Antibody

BNCH0867-100 Biotium 100uL 238.8 EUR

Nuclear Membrane(AE-5) Antibody

BNCH0867-500 Biotium 500uL 652.8 EUR

Golgi Complex(AE-6) Antibody

BNCH0868-100 Biotium 100uL 238.8 EUR

Golgi Complex(AE-6) Antibody

BNCH0868-500 Biotium 500uL 652.8 EUR

Mitochondrial Marker(AE-1) Antibody

BNCH0905-100 Biotium 100uL 238.8 EUR

Mitochondrial Marker(AE-1) Antibody

BNCH0905-500 Biotium 500uL 652.8 EUR

UACA / Nucling(AE-5) Antibody

BNCH0956-100 Biotium 100uL 238.8 EUR

UACA / Nucling(AE-5) Antibody

BNCH0956-500 Biotium 500uL 652.8 EUR

Nuclear Membrane(AE-5) Antibody

BNCAP0867-100 Biotium 100uL 238.8 EUR

Nuclear Membrane(AE-5) Antibody

BNCAP0867-500 Biotium 500uL 652.8 EUR

Golgi Complex(AE-6) Antibody

BNCAP0868-100 Biotium 100uL 238.8 EUR

Golgi Complex(AE-6) Antibody

BNCAP0868-500 Biotium 500uL 652.8 EUR

Mitochondrial Marker(AE-1) Antibody

BNCAP0905-100 Biotium 100uL 238.8 EUR

Mitochondrial Marker(AE-1) Antibody

BNCAP0905-500 Biotium 500uL 652.8 EUR

Inoltre, abbiamo ridotto significativamente il tempo di trattamento a meno di 1 ora dopo SDS-PAGE e lo abbiamo trasferito sulla membrana. Innanzitutto, abbiamo ottenuto un segnale lineare che varia da 30 ng a 1 microg di proteine ​​(a seconda delle dimensioni della proteina), rendendo la quantificazione del Western blot più semplice e affidabile.