Applicazione clinica del kit ELISA fatto in casa per l’anticorpo anti-recettore della fosfolipasi A2 umana

Confronto dell’utilità della subunità B8/2 ricombinante dell’antigene B, dell’antigene nativo e di un  kit ELISA  commerciale  nella diagnosi   dell’echinococcosi cistica umana

1. L’echinococcosi cistica (CE) è una malattia elmintica causata dalla forma larvale di Echinococcus granulosus. Nel presente studio, la subunità B8/2 dell’antigene B (AgB) di E. granulosus è stata espressa nell’ospite di E. coli e quindi applicata in un ELISA diagnostico.
2. La sequenza di DNA della subunità AgB8/2 di E. granulosus è stata estratta dal GenBank e ottimizzata per il codone. La sequenza target è stata clonata in un vettore di espressione (pGEX-4T-1). L’antigene prodotto è stato utilizzato in un sistema ELISA e sono state valutate le sue prestazioni per la diagnosi di cisti idatidee umana, utilizzando sieri di pazienti CE e non CE, insieme a sieri di soggetti sani.
3. Inoltre, il valore diagnostico della proteina ricombinante è stato confrontato con AgB nativo, nonché con un kit commerciale.
4. Anticorpi contro la cisti idatidea sono stati rilevati in 27 pazienti su 30 corrispondenti a una sensibilità del 90% (IC 95%: 73-98%). In due casi è stata osservata una reazione crociata con sieri di soggetti non CE che ha portato a una specificità del 93,5% (IC 95%: 82-98%) per il test. Una sensibilità dell’87% e una specificità del 90% sono state trovate per la forma nativa dell’antigene, mentre il kit commerciale ELISA aveva una sensibilità del 97% e una specificità del 95%.
5. I nostri dati mostrano che rEgAgB8/2 è una fonte appropriata di antigene per la diagnosi sierologica della cisti idatidea umana. La coespressione di rEgAgB/2 insieme ad altre subunità di AgB può migliorare le prestazioni di questi antigeni per la sierodiagnosi dell’EC umana.

Inaffidabilità di tre kit commerciali Coxiella burnetii IgM  ELISA  di fase II  per il sieroscreening della febbre Q acuta in   casi umani

• La sieroprevalenza della febbre Q (QF) causata da Coxiella burnetii è stata segnalata in diverse parti dell’India. Di solito vengono utilizzati test sierologici/molecolari per il rilevamento dell’infezione. Il presente studio è stato intrapreso per verificare la validità di tre diversi kit QF IgM ELISA di fase II per la diagnosi di QF acuto confrontandoli con il test degli anticorpi a fluorescenza indiretta (IFA) del gold standard.
• Cinquantotto campioni di siero raccolti da 42 pazienti (26 pazienti hanno fornito solo campioni acuti e 16 campioni sia acuti che convalescenti) che sono stati esaminati da tutti e tre i kit commerciali, sono stati sottoposti a controlli incrociati con IFA IgM di fase II QF per la conferma.
• Undici pazienti sono risultati positivi agli anticorpi C. burnetii mediante IFA in campioni di siero acuti e/o convalescenti. Prendendo IFA come riferimento, le percentuali di sensibilità, specificità, valore predittivo positivo e valore predittivo negativo per Virion-Serion/Vircell/NovaTec erano 36,36, 61,29, 25,00, 73,08; 81.82, 35.48, 31.03, 84.62 e 100, 25.81, 32.35, 100 per cento, rispettivamente.

I tre diversi kit ELISA hanno mostrato uno scarso accordo tra loro e un livello inaccettabile di falsa positività. L’IFA rimane l’unica opzione per la diagnosi di QF acuto. La discrepanza tra i risultati clinici e i risultati IFA/ELISA deve essere confermata dal rilevamento del DNA di C. burnetii nella reazione a catena della polimerasi in tempo reale.